Ribo-off rRNA depletion kit (Plant)
植物去除rRNA试剂盒
植物根、种子和叶片总RNA中去除rRNA;mRNA和非编码RNA分析
· 兼容性强:能兼容多种植物物种,同时针对植物的不同部位(根、种子和叶片)也具有良好的兼容性。
· rRNA残留率低:针对不同物种均能有效去除rRNA
1.低的rRNA残留率
针对不同物种,Vazyme N409均能有效去除rRNA,较大程度减少rRNA的残留导致的数据浪费,且去除效率优于illumina同类产品。
2.优异的数据质量
对下机数据过滤后得到的高质量clean reads,根据参考序列使用HISAT2软件对序列进行比对分析,得到mapping rate。Vazyme N409搭配后续的建库模块的下机数据,在Mapping rate上优于illumina。
Ribo-off rRNA depletion kit (Plant)是针对植物根、种子和叶片总RNA中去除rRNA的试剂盒。本试剂盒适用于模板起始量为1 - 5 μg的植物总RNA,总RNA样本经过rRNA与探针杂交、RNase H消化、DNaseⅠ消化等步骤,将rRNA(包括5S、18S和25S rRNA)从总RNA中去除,保留mRNA和其它非编码RNA,可用于LncRNA等非编码RNA的分析;试剂盒额外提供了靶向线粒体rRNA和叶绿体rRNA的消化探针,可以高效去除多种植物种属主要的rRNA,提供信息充实的测序结果。该试剂盒同时适用于完整的和部分降解的RNA样本,所得的产物适用于RNA文库及其他实验。
组分 | N409-01 (12 rxns) | N409-02 (24 rxns) |
rRNA Probe (Plant) | 24 μl | 48 μl |
Probe Buffer | 36 μl | 72 μl |
RNase H Buffer | 48 μl | 96 μl |
RNase H | 12 μl | 24 μl |
DNaseⅠBuffer | 348 μl | 696 μl |
DNaseⅠ | 12 μl | 24 μl |
Nuclease-free ddH2O | 1 ml | 2 × 1 ml |
-30°C~-15°C保存
1.如果纯化产物用于文库构建,但是使用的是Nuclease-free H2O洗脱的,如何操作?
若条件允许,加入等体积2 × Frag/Prime Buffer (Vazyme #N402),之后反应体系均放大,直至做到纯化步骤,恢复体系,也可以再次使用VAHTS® RNA Clean Beads (Vazyme#N412)进行纯化,最后用Frag/Prime Buffer洗脱。
2.纯化产物可以保存多久?
纯化产物由于浓度较低容易降解,去除rRNA的样品应尽快进行下游实验,否则请-80 ~ -65℃保存。
3.如果文库浓度过低,可以从哪些角度去寻找原因并如何改进?
以高质量的RNA样品为模板构建得到的文库浓度都能达到上机测序要求,如果无法提供合格的RNA样品,可尝试使用下方法弥补:
①起始量:提高样品起始量,最大可做到5 μg;
②做几个重复的样品,到纯化步骤合并在一起,或做到文库扩增前合并在一起;
③做不分选方案:94℃ ,8 min打断条件下RNA片段虽然偏小,但是分布会很集中,均一性也较好,有些个性化样品会出现打断不均一、某些大小的片段较多,经过PCR更明显,出现刺峰,这种情况在不分选方案中出现很少。
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