FastPure Host Removal and Microbiome DNA Isolation Kit
宿主克星,病原微生物DNA提取
微生物DNA提取;产物可用于PCR;qPCR;宏基因组文库构建;芯片分析;二代测序
- 高效:高效清除宿主核酸,提高微生物检出
- 超快:宿主核酸清除仅需43min,微生物DNA提取仅需23min
- 灵活:兼容血液、拭子、痰液、肺泡灌洗液等多种临床样本
1.高效清除宿主核酸
图1. 提取产物中宿主基因qPCR定量结果
使用qPCR法对Vazyme #DC501、Q*和Z*公司同类产品提取产物中宿主基因的保守区进行定量,平均CT值越高,表示宿主核酸含量越低。结果表明:Vazyme #DC501可以有效清除宿主核酸,且清除效率高于Q*和Z*公司同类产品。
2.提高微生物检出
图2. 宿主核酸清除前后的序列占比
图3. 属水平下痰液样本中微生物检出情况
以Vazyme #DC501、Q*和Z*公司同类产品的提取产物为模板,使用Vazyme #ND617进行文库构建,经质控合格后的文库使用Illumina HiSeq X10平台进行PE150测序分析。结果表明:Vazyme #DC501不仅可以显著降低宿主序列占比,还可以显著提高微生物检出数。
本试剂盒适用于从生物液体样本(血液、肺泡灌洗液、痰液、脑脊液、拭子等)中选择性地清除宿主核酸并快速分离纯化微生物DNA。试剂盒中的Buffer SL选择性地将宿主细胞裂解,释放的宿主核酸被Ultra Nuclease核酸酶迅速降解,而细菌、真菌等微生物在此过程中几乎无损失。本试剂盒也适用于不进行宿主核酸清除,直接从各种复杂样本中提取包括细菌、真菌、病毒等微生物和宿主在内的所有物种DNA。本试剂盒分离的DNA适用于多种下游应用,包括PCR、Real-Time PCR、宏基因组文库构建、芯片分析等。
Box1,-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输;
Box2,15 ~ 25℃保存,室温运输;
Box3,2 ~ 8℃保存,根据不同目的地调整运输方式。
常见问题 |
原因 |
解决方案 |
宿主核酸清除效率低 |
样本投入量过多 |
减少样本投入量 |
样本裂解不充分 |
延长08-1 Part I步骤1室温上下颠倒混匀的时间 |
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宿主核酸降解不彻底 |
增加Ultra Nuclease用量或延长08-1 Part I步骤3水浴时间 |
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微生物非特异性损失 |
弃上清步骤导致微生物损失 |
08-1 Part I步骤2弃上清时,切勿触碰沉淀,以避免微生物损失 |
08-1 Part I步骤4,Proteinase K 消化时间过长 |
请按照说明书规定时间进行操作 |
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样本被反复冻融 |
请使用新鲜且未经过冻融的样本 |
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DNA产量低 |
细胞壁破碎不完全 |
适当增加机械裂解时间,充分破壁 |
裂解混合物未完全转移至吸附柱内 |
细胞裂解后加入无水乙醇,溶液中可能出现絮状物, 请将其一同转移至吸附柱内 |
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洗脱效率低 |
将Buffer EB预热至55℃后再使用,增加洗脱体积及洗脱次数 |
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Buffer WB未添加无水乙醇 |
按瓶身标签所示,加入指定体积的无水乙醇至 Buffer WB中 |
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DNA纯度低 |
杂蛋白污染 |
未使用Buffer WP和Buffer WB漂洗 |
杂质离子污染 |
未使用Buffer WB漂洗,可使用Buffer WB漂洗两次 |
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乙醇残留 |
吸附柱在洗脱前,未空柱离心去除乙醇。 |
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