Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag
CUT&Tag
抗体兼容性强:Protein AG可兼容多种来源抗体
细胞起始量低:可兼容低细胞投入量,低至单细胞
纯度高:蛋白纯度高,核酸残留低
Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag是将融合蛋白Protein AG与经过工程学改造的高活性Tn5转座酶进行融合,形成同时具备转座活性与融合蛋白Protein AG活性的新型融合酶,专门适用于蛋白质-DNA互作研究的CUT&Tag (Cleavage Under Target&Tagmentation)技术。CUT&Tag技术是一种研究蛋白质-DNA相互作用的新技术,将定向进化的转座酶与Protein AG相融合,在抗体引导下靶向目的蛋白,并在目的位点附近进行DNA的片段化。与传统的蛋白质-DNA互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&Tag具有显著优势,该技术实验周期短,信噪比高,可重复性好,且细胞投入量低,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。
片段化活性检测
使用S604两种包埋体系(2 μg和10 μg体系)生成的转座子针对不同DNA投入量(50 ng和100 ng)进行片段化活性检测,如图所示,1 μl转座子即可快速(10 min)实现DNA片段化。
整个试剂盒于-85 ~ -65℃保存,干冰运输;
收到货后Hyperactive pAG-Tn5 Transposase于-85 ~ -65℃保存,其余组分可于-30 ~ -15℃保存;
生成的转座子于-30 ~ -15℃保存,有效期一年。
Q1:CUT&Tag适用于什么物种?
A1:CUT&Tag广泛适用于常规哺乳动物细胞的蛋白质-DNA互作研究,植物等细胞可以经过特殊的处理(破除细胞壁或者提取细胞核)进行实验。
Q2:CUT&Tag的抗体如何选用?
A2:一抗优先选用已验证过的ChIP级别抗体,其次选用IF级别抗体,目前也有发表Flag、His等标签抗体的CUT&Tag文章,对于WB级别抗体,请谨慎尝试。二抗要根据一抗的种属进行选择,且不带任何修饰,避免抗原表位决定簇的遮盖影响pAG-Tn5的结合。
Q3:CUT&Tag实验中细胞活性很重要吗?
A3: 非常重要。细胞活性和细胞核完整性是CUT&Tag实验成功与否的先决条件,生长状态不佳或死亡的细胞中,染色质易变得松散,Tn5会对开放片段进行随机切割,导致文库质检峰形图不呈现ladder状而是宽峰,下机数据中也会出现较强的背景噪音。
Q4:S604能搭配CUT&Tag试剂盒使用吗?
A4:可以搭配TD903,不能搭配TD904。
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