FastPure Blood DNA Isolation Mini Kit V2
兼容体积广、快速提取血液样本
血液gDNA提取;产物可用于酶切;PCR;Southern杂交;qPCR;文库构建;二代测序
- 样本适用范围广:适用于从含各种抗凝剂的新鲜和冻存人血及不同物种的血液中提取基因组DNA
- 体积兼容范围广:可兼容0.1-1 ml血液基因组DNA的提取
- 冻存、冻融血液适用性强:对于冻存血液、反复冻融血液也有较好的提取效果
- 简便快捷:整个流程仅需约20分钟的手动操作
1.产量高、纯度优、完整性好
分别使用Vazyme #DC111与市售相关产品(分别来自T-1、T-2、Q、O、M),按照各自说明书提取200 μl人EDTA抗凝血样本基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳检测提取产物,使用Onedrop测定提取基因组浓度及纯度,从图中可以看出,Vazyme #DC111提取基因组DNA完整性好,产量高,纯度好。
2.样本适用范围广
使用Vazyme #DC111与Q公司相关产品对以下六种样本进行基因组DNA纯化:三种200 μl人抗凝血(分别含EDTA、肝素钠、枸橼酸钠抗凝剂)、200 μl猪血(含枸橼酸钠抗凝剂)、20 μl鸡血(含枸橼酸钠抗凝剂)以及200 μl鼠血(含EDTA抗凝剂),通过琼脂糖凝胶电泳检测提取产物,结果显示Vazyme #DC111样本兼容性广泛。
3.体积兼容范围广
使用Vazyme #DC111与T公司相关产品提取100 μl、200 μl、500 μl、1000 μl人EDTA抗凝血基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测提取产物,结果显示Vazyme # DC111可完美兼容0.1-1 ml血液基因组DNA的提取。
本试剂盒采用硅胶膜纯化技术,可以快速简便地从0.1 - 1 ml新鲜和冻存的抗凝全血样品中提取基因组DNA,无需使用酚氯仿等有毒试剂,也无需进行耗时的醇类沉淀。此外,该试剂盒能够较大限度的去除RNA、杂蛋白、脂类及其他抑制性杂质,提取的基因组DNA纯度高,质量稳定,可用于酶切、PCR、Southern杂交等下游实验。
试剂盒除Proteinase K外,其他组分于15 - 25℃储存,室温运输;
Proteinase K可在15 - 25℃储存三个月,长期储存需置于2 - 8℃,室温运输。
Q1:吸附柱堵塞
A1:(1)裂解不完全:适当延长步骤2孵育时间,在孵育期间增加颠倒混匀次数;
(2)样品量太多:调整样品投入量,并按照不同体积对应提取方案提取。
Q2:DNA产量低
A2:(1)血液样品保存不当、反复冻融次数过多或者保存时间过长:尽量使用新鲜血液样品提取基因组;
(2)血液用量过少:无核红细胞抗凝全血建议使用100 μl以上抗凝全血提取基因组;有核红细胞抗凝全血建议使用5 μl以上抗凝全血提取基因组;
(3)肝素抗凝血未用ACK Lysis Buffer进行处理:务必按照说明书用ACK Lysis Buffer进行处理;
(4)Proteinase K保存不当导致其活性降低或失活:确认Proteinase K的保存条件或更换新的Proteinase K进行消化反应;
(5)洗脱液问题:请使用Elution Buffer洗脱;若用ddH2O或其他洗脱液,确认洗脱液pH值在7.0 - 8.5之间;
(6)洗脱不充分:洗脱液需加至吸附柱膜中央位置,增加洗脱体积或增加洗脱次数;
(7)Buffer WA/ Buffer WB未添加无水乙醇:请参考试剂瓶标签说明加入正确体积的无水乙醇。
Q3:DNA纯度低
A3:(1)样本投入量不要太多;
(2)样本应进行充分裂解:样品与Buffer BCL及Proteinase K混匀不充分,重新提取血液样品并振荡使样品与Buffer BCL及Proteinase K及时充分混匀,适当延长孵育时间,在孵育期间增加颠倒混匀次数;
污染及处理建议:
(1)杂蛋白污染:未使用Buffer WA洗涤吸附柱,或用Buffer WA洗涤吸附柱时没有使用正确的离心转速。务必按说明书用Buffer WA洗涤吸附柱,并确保Buffer WA中已加入正确体积的乙醇;
(2)杂质离子污染:省略了Buffer WB洗涤吸附柱或者只洗涤了一次。按说明书使用Buffer WB洗涤两次,尽量去除残留的离子;
(3)乙醇残留:Buffer WB洗涤吸附柱后,没有进行空管离心操作。请按照说明书进行空管离心操作;
Q4:后续做QPCR实验,采血用EDTA抗凝还是肝素钠抗凝?
A4:建议用EDTA抗凝保存,对后续做QPCR没有影响;若是用肝素钠抗凝(对后续做QPCR会有影响),可参考DC111说明书的“使用方案”中的相关解决方案。
Q5:DC111可以提血清DNA吗?
A5:没有测试过。
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