Library Dilution Buffer
文库稀释液试剂盒
测序文库浓度绝对定量;检测实验环境中文库污染程度
· 包含定量所有必须组分
· 新型染料法qPCR预混液VAHTS SYBR qPCR Master Mix
· 扩增效率高、 GC含量兼容性好
· 标准品定量准确,批次间CV值<5%
· 精心优化的ROX染料浓度,提供ROX预混版本
· 兼容所有主流定量PCR仪
图1. 使用VAHTS Library Quantification Kit for Illumina绘制的标准曲线。
本品是使用染料qPCR法进行Illumina平台高通量测序文库浓度测定的专用试剂盒。其工作原理为使用标准品绘制标准曲线,再根据标准曲线计算待测文库浓度。试剂盒采用了一种基于抗体法热启动的新型染料法qPCR预混液VAHTS SYBR qPCR Master Mix。该预混液具有特异性高、扩增效率高、 GC含量适应性广、检测灵敏度高等诸多优势,非常适合进行文库浓度的绝对定量。 试剂盒中提供的所有试剂都经过了严格的质量控制,较大程度上保证了不同批次间实验结果的可重复性。
包装说明:
1. NQ101、NQ102、NQ103、NQ104为扩增组分试剂盒,包含VAHTS SYBR qPCR Master Mix、qPCR Primer Mix以及单独包装ROX (仅NQ101),包装量足够进行500次定量反应(20 μl reaction);NQ105为标准品试剂盒,包含DNA Standard 1-6,包装量可用于8次标准曲线绘制(3孔重复);NQ106为文库稀释液试剂盒,包含50 ml Library Dilution Buffer。
2. 根据反应时ROX Reference Dye是否需要添加及需要添加的种类分类,主流定量PCR仪可分为以下三类:
NQ101试剂盒中提供单独包装的ROX Reference Dye 1/2,适用于所有定量PCR仪。使用时根据上表选择适合的ROX Reference Dye;
NQ102试剂盒中无单独包装或预混ROX Reference Dye,适用于上表Type I 机型定量PCR仪;
NQ103试剂盒中的扩增预混液已预混Low ROX (ROX Reference Dye 2),适用于上表Type III 机型定量PCR仪;
NQ104试剂盒中的扩增预混液已预混High ROX (ROX Reference Dye 1),适用于上表Type II 机型定量PCR仪。
所有组分应置于-30 ~ -15℃保存,Master Mix与ROX应避光。于2 ~ 8℃运输。
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Q1:文库能否用水稀释,不用文库稀释液稀释?
A1:为了定量的稳定性,建议用稀释液稀释,因为文库稀释了106倍,浓度很低了,会出现随机挂壁的情况,这样测试的结果可能会出现均一性较差的情况。
NQ105说明书上有稀释液的配方,可自行配置;也可以购买我们的NQ106文库稀释液。
Q2:文库质量浓度在标品范围内,是否需要稀释?
A2:文库经Qubit定量后,所测浓度在标准品的范围内,一般可以不用稀释。但是建议稀释一倍,以检测定量结果的准确性。
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